사람 cytochrome p450 환원효소, cytochrome p450 1A2 및 N-아세틸전환효소를 동시에 발현하는 retroviral plasmid 제조

초록

발암물질이나 독성물질이 체내에 투여된 경우 화학물질을 배출시키는 생화학적 방어기구가 작동한다. 그런데 산화, 환원반응을 통하여 극성대사물질로 변환시키는 1상 반응 및 대사물질을 포합시키는 2상 반응의 유기적인 협동체계에 의하여 오히려 반응성이 강한 활성 대사산물이 형성되어 독성 및 발암작용을 나타내기도 하는데 이러한 경우를 대사활성화 (metabolic activation)라 한다. 본 연구에서는 사람 cytochrome p450 reductase (CYPR), 사람 cytochrome p450 1A2 (CYP1A2) 및 N-acetyltransferase 2 (NAT2) 유전자를 연속적으로 발현하여 CYP1A2 및 NAT2 유전자의 상호작용에 의한 약물대사능의 상승효과가 있는지를 알아 보고자 하였다. CYPR, CYP1A2 및 NAT2 유전자를 internal ribosome entry site를 이용하여 neomycin 저항 유전자를 발현하는 retroviral vector에 cloning 하여 HCYP1A2TC5-CLSN22 플라스미드를 제조하였다. HCYP1A2TC2-CLSN22 플라스미드를 calcium phosphate법으로 293GPG packaging 세포주에 transfection하여 retrovirus를 만든 다음 Chinese hamster ovary 세포주에 transduction하여 Western blot으로 세가지 단백의 발현을 측정한 결과 CYPR, CYP1A2 및 NAT의 분자량은 각각 76kDa, 58kDa 및 34kDa으로 발현됨을 확인하였다. 이상의 연구 결과에서 확립된 CYPR, CYP1A2 및 NAT2 유전자를 동시에 발현하는 플라스미드를 이용하여, 대사기전 1상 유전자와 2상 유전자를 동시에 발현하는 세포주를 확립할 수 있게 되었으며, 이를 이용하여 CYP450 및 NAT 기전연구 뿐만 아니라 독성물질의 대사활성화를 연구하는데 널리 응용할 수 있다고 사료된다.