Fast Protein Liquid Chromatography를 이용한 황색포도상구균 장독소 B 분리

초록

황색포도상구균 식중독은 해당 균이 세포 밖으로 분비하는 장독소에 의해 발병되며, 지금까지 밝혀진 16가지독소 중 내열성이 가장 강하고 흡입중독으로 쉽게 질환을일으킬 수 있는 Staphylococcal enterotoxin B형을 분리해내는 방법에 대해 연구하였다. 분자량 26-29 kDa의 단순단백질인 SEB를 분리 및 정제하기 위한 방법으로 fast protein liquid chromatography (FPLC)를 이용하였으며, 정제율을 높이기 위해 ion exchange chromatography와 gel filtration chromatography의 두 과정을 거쳤다. 실험결과 SEB의 분리 조건은 CIEX에서 WorkBeads 40S컬럼의 분리능이 가장 좋았고, 염 농도 15%에서 SEB가 분리됨을 확인하였다. CIEX에서 획득한 분획으로 단백질을 크기별로 나누는 GF를 실시하였을 때, Sephacryl S-100컬럼을 사용하여 정제된 SEB를 획득할 수 있었다. 시료가 컬럼을 통과할 때 염 농도가 효율적으로 조절될 수 있도록 하고 SEB를 농축하려 시도한 투석 및 완충액 치환방법은 전체적인 단백질량 손실을 가져오는 것으로 나타났다. 본 연구에서 개발된 독소 분리 및 정제 방법은 향후 다른 장독소 분리에도 활용할 수 있으며, 식중독 신속진단법 개발 및 항체 생산 발전에 효율을 높일 수 있을 것으로 기대된다.

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